一、PCR實驗室四要素

1、試劑準(zhǔn)備區(qū)

         用于試驗試劑的準(zhǔn)備。該區(qū)域為正壓，目的是防止污染物質(zhì)溢入。該區(qū)域內(nèi)部又可分為3個區(qū)域：普通提取試劑的準(zhǔn)備區(qū)、PCR試劑準(zhǔn)備區(qū)和PCR主反應(yīng)液準(zhǔn)備區(qū)。在普通提取試劑的準(zhǔn)備區(qū)內(nèi)準(zhǔn)備一些樣品核酸提取時所需的裂解液、提取液等；PCR試劑準(zhǔn)備區(qū)用于PCR試劑的制備和保存。例如準(zhǔn)備引物、探針等PCR試劑。為了防止交叉污染，避免反復(fù)冷凍和解凍，試劑存貯溶液應(yīng)該被平均為小的工作體積，儲存在這個房間以備后用：PCR主反應(yīng)液準(zhǔn)備區(qū)將進(jìn)行主反應(yīng)混合液(除了樣品。所有PCR所需試劑的混合)添加到PCR管的操作。重要提示：不能將其它房間的材料(包括擴(kuò)增、模板和目標(biāo)核酸或陽性對照、供應(yīng)品、或設(shè)備)帶進(jìn)試劑準(zhǔn)備區(qū)。

2、樣品準(zhǔn)備區(qū)

         該區(qū)域無壓力設(shè)置要求。該區(qū)域是用于對樣品進(jìn)行分樣，將樣品進(jìn)行研磨、粉碎、勻漿的區(qū)域。由于在這些粉碎、研磨和勻漿處理過程中會產(chǎn)生氣溶膠，因此，存在陽性樣品污染后續(xù)操作的可能性。該區(qū)域與后面的區(qū)域應(yīng)嚴(yán)格隔離，應(yīng)放在與后面的三個區(qū)域隔開的獨(dú)立的房間中。在樣品準(zhǔn)備區(qū)內(nèi)還可設(shè)立一個專用的封閉區(qū)或房間用于樣品的接收和儲存。這個房間可以放置冰箱用于樣品儲存，應(yīng)該和樣品準(zhǔn)備區(qū)其它區(qū)域隔離開。樣品準(zhǔn)備區(qū)域的人員不得進(jìn)入試劑準(zhǔn)備區(qū)。

3、核酸提取區(qū)

         核酸提取區(qū)是進(jìn)行樣品核酸提取的區(qū)域。該區(qū)域為負(fù)壓，目的是防止核酸溢出造成污染。樣品準(zhǔn)備區(qū)又包括從樣品中進(jìn)行核酸提取和純化的區(qū)域以及將核酸加到包含PCR主反應(yīng)混合液管中的操作區(qū)域。添加完樣品后，PCR管的蓋子要盡可能快地蓋好。使用PCR板和膠蓋時，陽性對照和含目標(biāo)序列的樣品要與待測樣本分開操作，以避免模板添加時造成交叉污染

4、擴(kuò)增和產(chǎn)品檢測區(qū)

         該區(qū)域是用來進(jìn)行PCR擴(kuò)增和PCR分析的。PER儀放置在這個區(qū)域。房間保持負(fù)壓，目的是防止核酸溢出。在該區(qū)域人員一定要一直穿戴工作服和手套，在離開房間前脫去，防止擴(kuò)增子污染其它地點(diǎn)。所有用于擴(kuò)增和產(chǎn)品檢測的設(shè)備要用于這個房間。PCR分析]二作也設(shè)置在該區(qū)域，例如：酶切、測序、克隆等，但實驗室應(yīng)盡可能把這些活動分隔在不同區(qū)域或不同房間。以降低擴(kuò)增產(chǎn)物的污染風(fēng)險。如果沒有條件在該區(qū)域設(shè)立負(fù)壓，此區(qū)域必須建立排風(fēng)裝置。

二、PCR實驗室的功能分區(qū)

1、基因擴(kuò)增實驗室的設(shè)計通常有四大分區(qū)：試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、核算擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)。這四個分區(qū)原本就不需要連接在一起，且在物理空間上必須是獨(dú)立的，各區(qū)域無論在空間上還是在使用中，應(yīng)處于的分隔狀態(tài)，不能有空氣的直接相通。

2、PCR實驗室的功能區(qū)分布：

① 基因擴(kuò)增實驗室的用房分區(qū)可分散布置，可集中布置；集中布置的分布原則是依次排列、獨(dú)立分區(qū)；4個基本分區(qū)可根據(jù)需要進(jìn)行遞增/減。如下為PCR實驗室功能分區(qū)的常見布局

② 建筑上，緩沖間是阻隔空氣交換的首要措施

③ 進(jìn)入工作區(qū)域應(yīng)嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行，即：試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)——標(biāo)本制備區(qū)——核算擴(kuò)增區(qū)——產(chǎn)物分析區(qū)

三、PCR實驗室類型

         PCR實驗室可以是分散形式，也可以是組合形式。完成一組PCR實驗，通常應(yīng)經(jīng)過試劑配制、樣品處理、核酸擴(kuò)增及產(chǎn)物分析四個實驗過程，若實驗工藝需要，還應(yīng)增加樣品粉碎過程。

①分散形式PCR實驗室：

         所謂分散形式PCR實驗室，是指完成上述實驗過程的實驗用房彼此相距較遠(yuǎn)，呈分散布置形式。對于這種布置形式的PCR實驗室建設(shè)設(shè)計，由于各個實驗之間不易相互干擾，因此無需特殊條件要求。

②組合形式PCR實驗室：

         所謂組合形式, 是指完成基因擴(kuò)增四個實驗過程的實驗用房相鄰布置，組成獨(dú)立實驗區(qū)域的形式。對于組合形式PCR實驗室的建設(shè)設(shè)計，由于各個實驗間集中布置，容易造成相互干擾，因此，對總體布局以及屏障系統(tǒng)具有一定的要求。各室在入口處設(shè)緩沖間，以減少室內(nèi)外空氣交換。

WOL 承接 PCR檢測實驗室 無菌操作室 設(shè)計裝修

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